一、原理

 ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay）的简称。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原-抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 

二、结果判断

1，定性测定

定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。

2、定量测定

ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。

测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。

三、主要生产工艺 

（一）酶标板的制备： 

1．工艺流程                          

 （A）包被液的配制 →（B）封闭液的配制→（C）酶标板的包被 →（D）酶标板封闭 →（E）酶标板的干燥、包装 （有些产品封闭前需先洗板） 

2．关键点控制 

（1）包被： 

1）确认包被液的相关信息（名称、浓度、批号、批量等）； 

2）包被液量控制在要求范围内； 

3）温育或冷育的温度、时间在要求范围内。关键设备：包被机、天平、加样器。 

（2）封闭： 

1）确认洗板的次数（如有洗板）； 

2）确认配制封闭液的相关信息（名称、浓度、批号、批量等）； 

3）封闭液量控制在要求范围内； 

4）温育或冷育的温度、时间在要求范围内。关键设备：包被机、洗板机、天平、加样器。 

（3）干燥、包装： 

1）干燥的温湿度在要求范围内； 

2）干燥结束的酶标板逐一装入铝箔袋中同时放入一袋干燥剂，装袋同时要将酶标板标识不清楚的、板孔有缺损的挑出报废。关键设备：包装机。 

（二）酶标试剂的制备： 

1．工艺流程 （A）液体的配制→（B）液体的分装 

2．关键点控制 

（1）液体配制过程物料量取准确； 

（2）确认配制溶液的外观符合要求； 

（3）确认配制试剂的相关信息（名称、浓度、批号、批量等）； 

（4）控制液体分装量范围，应满足要求。关键设备：天平、分装机。 

（三）阴、阳性对照的制备： 

1．工艺流程 （A）原料的灭活（如需）→（B）液体的配制→（C）液体的分装 

2．关键点控制 

（1）控制灭活温度和时间（如灭活）； 

（2）液体配制过程物料量取准确； 

（3）确认配制阴阳性对照的相关信息（名称、浓度、批号、批量等）； 

（4） 控制液体分装量范围，应满足要求。关键设备：水浴锅（如灭活）、天平、分装机。 

（四）其他组分的制备： 

1．工艺流程 （A）液体的配制→（B）液体的分装 

2．关键点控制 

（1）液体配制过程物料量取准确； 

（2）确认配制试剂的相关信息（名称、批号、批量等）； 

（3）控制液体分装量范围，应满足要求。关键设备：天平、分装机。 

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